Métodos de análisis de los fluidos corporales

Análisis de fluidos corporales

La detección e identificación de fluidos corporales en el lugar del crimen puede proporcionar información esencial sobre los hechos que pueden haber ocurrido y las personas implicadas. La presencia de fluidos corporales, su localización y el perfil de ADN obtenido a partir de ellos pueden proporcionar a los organismos policiales una gran cantidad de información que ayude a la investigación.

Por desgracia, el análisis de los fluidos corporales puede ser un proceso largo. En el lugar del incidente se pueden emplear técnicas de visualización para localizar inicialmente posibles fluidos corporales, por ejemplo, fuentes de luz alternativas (ALS). Las ALS utilizan diferentes longitudes de onda de luz para visualizar manchas que, de otro modo, serían invisibles o ambiguas, y algunas incluso pueden mostrar manchas que han sido limpiadas o cubiertas por pintura. Sin embargo, el uso de fuentes de luz alternativas no suele permitir la diferenciación entre distintos fluidos corporales. Una vez localizados los posibles biofluidos in situ, se pueden utilizar pruebas de presunción para indicar la posible identidad de la mancha y, tras la recogida de la muestra, se suelen realizar análisis de confirmación y de ADN. Lamentablemente, no existe un método único para el análisis de todos los fluidos corporales, y puede ser necesario emplear múltiples técnicas en función del tipo de biofluido.

Sangre

La sangre, sin duda el fluido corporal de mayor interés que se encuentra en el lugar del delito, está compuesta principalmente por agua, junto con células sanguíneas, proteínas, minerales, hormonas, glucosa y muchos metabolitos. Debido a la evidente importancia de la sangre en el contexto forense, se ha desarrollado una serie de pruebas para su identificación. Inicialmente se pueden utilizar pruebas presuntivas en el lugar del crimen para establecer si una mancha sospechosa es en realidad sangre. El luminol, quizá la prueba presuntiva más conocida, produce una luminiscencia azul distintiva en presencia de sangre, basada en la oxidación del luminol por la hemoglobina. Del mismo modo, la fluoresceína se basa en la oxidación acelerada por la hemoglobina de la fluorescina a fluoresceína, aunque requiere una fuente de luz alternativa para visualizar el cambio. Otra prueba presuntiva de sangre muy conocida es la fenolftaleína, también conocida como prueba de Kastle-Meyer, que hace que una solución alcalina adquiera una coloración rosa en presencia de sangre. El verde de leucomalaquita, o LMG, es otra prueba presuntiva popular, que provoca un cambio de color verde característico en presencia de hemo en la sangre. Además de éstas, también hay una serie de pruebas inmunológicas disponibles en el mercado para la sangre, como Heme Select, ABAcard y HemaTrace. El número de pruebas presuntivas disponibles para la detección de sangre es aparentemente interminable, y se pueden emplear diferentes técnicas en distintos países, e incluso entre distintos cuerpos de policía. Sin embargo, las pruebas son, como su nombre indica, sólo presuntas, y puede ser necesario realizar más análisis para confirmar la identidad de un fluido corporal sospechoso.

La prueba de identificación rápida de manchas (RSID) es un método basado en anticuerpos que puede emplearse para confirmar la presencia de sangre a partir de la detección de la glicoforina A. Además, los ensayos inmunoenzimáticos (ELISA) pueden utilizarse tanto para identificar la sangre como para diferenciar los distintos grupos sanguíneos. Para confirmar la presencia de sangre también se pueden utilizar algunas pruebas de cristales, como la prueba de Teichman, que se basa en la formación de hematina, o la prueba de Takayama, que utiliza la formación de cristales de hemocromógeno. También pueden aplicarse otras técnicas analíticas para la identificación de la sangre, como la microscopía para la identificación de las células sanguíneas, o métodos espectroscópicos como la espectroscopia UV-vis y de fluorescencia.

Saliva

La saliva puede ser muy variable en cuanto a su composición, especialmente debido al consumo reciente de alimentos o incluso a la hora del día en que se produce la saliva. Por lo general, está compuesta casi en su totalidad por agua, junto con electrolitos, células epiteliales, moco, proteínas, enzimas y diversos metabolitos exógenos y endógenos. Aunque quizás sea menos frecuente, la saliva también puede encontrarse durante una investigación criminal y, al igual que la sangre, puede visualizarse inicialmente utilizando fuentes de luz alternativas.

Desgraciadamente, existen muchas menos técnicas para la identificación de la saliva. Quizás el tipo de prueba presuntiva más utilizado se basa en la presencia de amilasa, una enzima que se encuentra en varios fluidos corporales pero que está presente en mayor cantidad en la saliva. La prueba de almidón-yodo dará lugar a un cambio de color azul al entrar en contacto con la saliva, causado por la presencia de almidón producido a partir de la descomposición de la amilasa salival. Del mismo modo, la prueba de la amilosa Azure produce un cambio de color azul tras la hidrólisis de la amilasa. Otra prueba comúnmente utilizada para la saliva es la prueba de Phadebas, también dirigida a la detección de la amilasa salival. También se ha desarrollado una prueba de identificación rápida de manchas (RSID) para la detección de saliva, diseñada específicamente para centrarse en la presencia de amilasa salival.

Orina

Compuesta principalmente por agua junto con urea, sales orgánicas, proteínas, hormonas y una gran variedad de metabolitos, la orina puede encontrarse en un contexto forense en casos de abuso o agresión sexual, por ejemplo. La orina es un fluido corporal difícil de detectar y, aunque suele ser fluorescente bajo fuentes de luz alternativas, el hecho de que generalmente esté muy diluida hace que sea problemático establecer una prueba suficientemente sensible y fiable.

Algunas pruebas presuntivas desarrolladas para la orina se basan en la presencia de urea, un compuesto orgánico que se encuentra en la orina en altas concentraciones. Este tipo de prueba presuntiva suele basarse en la enzima ureasa, que se descompone en urea y libera amoníaco y dióxido de carbono en el proceso. La prueba DMAC es quizás uno de los métodos más comunes para detectar la orina basándose en la presencia de urea, produciendo un color rosa o magenta si es positiva. La creatinina es otro compuesto que se encuentra en altas concentraciones en la orina, por lo que varias pruebas han intentado utilizarla para las pruebas de identificación de la orina. La prueba de Jaffe utiliza el ácido pícrico que, en presencia de la creatinina, forma un compuesto rojo conocido como picrato de creatinina. El cambio de color es proporcional a la concentración de creatinina presente. Del mismo modo, la prueba de Salkowski produce un color azul en presencia de orina mediante una reacción entre el nitroprusiato de sodio y la creatinina cuando se calienta. Por último, también se ha desarrollado la prueba inmunológica RSID para la detección de la orina, basada en la presencia de una proteína urinaria conocida como proteína de Tamm-Horsfall

Semen

El semen es un fluido viscoso segregado por los testículos, que contiene una variedad de componentes como azúcares, enzimas, lípidos y, por supuesto, espermatozoides. En un contexto forense, la presencia de semen es de especial importancia durante la investigación de las agresiones sexuales, por lo que, comprensiblemente, se ha desarrollado una amplia gama de pruebas para su identificación presuntiva y confirmatoria tras la visualización por ALS.

Las pruebas desarrolladas para la identificación del semen se basan en gran medida en la presencia de determinadas enzimas. Tal vez la prueba presuntiva más común tiene como objetivo detectar la fosfatasa ácida, una enzima producida en grandes cantidades por la próstata, que da lugar a un cambio de color observable si es positivo. Lamentablemente, esta prueba también puede reaccionar con la fosfatasa ácida vaginal, lo que da lugar a falsos positivos. Se han desarrollado otras pruebas basadas en la detección de otras enzimas, como la prueba de la leucina aminopeptidasa, pero no se utilizan habitualmente.

La confirmación de que una muestra es de semen puede lograrse normalmente mediante una simple microscopía para identificar la presencia de espermatozoides, normalmente utilizando una técnica conocida como la tinción del árbol de Navidad, que permite visualizar las cabezas de los espermatozoides. Por supuesto, en algunas situaciones esta prueba es inútil, por ejemplo si el donante se ha sometido a una vasectomía o si es azoospérmico (en el que el semen no contiene espermatozoides). Si este es el caso, existen pruebas adicionales que ayudan a confirmar la identidad de la muestra. Numerosos kits de pruebas disponibles en el mercado se basan en la detección del antígeno específico de la próstata (PSA), aunque es comprensible que la orina masculina pueda dar resultados falsos positivos. Otro método inmunológico es la prueba rápida de identificación de estaciones para el semen, que se basa en la detección de la semenogelina, una proteína primaria del semen humano.

Líquido vaginal

Las secreciones vaginales pueden consistir en una mezcla de líquido secretado a través de las paredes vaginales, moco cervical y orina residual. Aunque este fluido corporal en particular no suele encontrarse en la mayoría de las escenas del crimen, puede ser de vital importancia en la investigación de los casos de agresión sexual. Por desgracia, el desarrollo de un medio para identificar las secreciones vaginales ha resultado difícil, sobre todo porque la composición química de este fluido corporal puede cambiar a lo largo del ciclo menstrual.

Quizás el método más común se basa en la detección de células epiteliales glicogenadas utilizando un reactivo de Schiff ácido periódico, lo que hace que las células se tiñan de color magenta. La intensidad de este color está relacionada con la concentración de las células presentes. Sin embargo, una de las principales desventajas de este método en particular es que las mujeres posmenopáusicas o prepúberes pueden no mostrar células glucogénicas en sus secreciones vaginales, lo que hace que la prueba sea inútil.

Algunos métodos más antiguos se basaban en la presencia de ciertas enzimas, como las isoenzimas de la peptidasa vaginal y la lactato deshidrogenasa, pero estas pruebas no se utilizan mucho. La investigación también ha tenido como objetivo desarrollar métodos de identificación de las secreciones vaginales basados en los niveles de bacterias específicas y en la elaboración de perfiles de ARN; sin embargo, hasta ahora no se ha producido ningún método fiable.

¿Cómo de fiables son estas técnicas?

Se ha desarrollado un gran número de técnicas para la identificación de fluidos corporales en un contexto forense, que van desde pruebas presuntivas para una estimación rápida e in situ de la identidad probable hasta pruebas de confirmación basadas en el laboratorio. Sin embargo, hay varios problemas asociados a las técnicas existentes. El principal problema de todas las pruebas presuntivas es la falta de especificidad, ya que las pruebas suelen reaccionar con una serie de sustancias diferentes, por lo que los falsos positivos son un problema. Además, algunas de las pruebas no son especialmente sensibles, por lo que pequeñas cantidades de un fluido corporal pueden dar lugar a falsos negativos. Por último, las pruebas presuntivas y confirmatorias suelen destruir la muestra, lo que obviamente no es ideal si sólo se dispone de una pequeña cantidad de pruebas en primer lugar.

Por ello, las investigaciones en curso pretende desarrollar técnicas de identificación de fluidos corporales no destructivas, sensibles y específicas.

Fuente
Virkler, K. Lednev, I. K. Analysis of body fluids for forensic purposes: From laboratory testing to non-destructive rapid confirmatory identification at a crime scene. For Sci Int. 188, 1-17 (2009).

Bodily Fluids Analysis. (s/f). Aboutforensics.co.uk. Recuperado el 10 de noviembre de 2021, de https://aboutforensics.co.uk/bodily-fluids-analysis/

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